Purification engineering technology research center of Sichuan Province Natural Medicine
四川省天然藥物分離純化工程技術研究中心
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對照品使用中的常見問題及解決方案（三）——色譜峰拖尾、前沿
本文來自： 發(fā)布時間：2025-09-28
在使用對照品進行色譜檢測時，色譜峰拖尾或前沿會嚴重影響定量的準確性和分離度。以下從幾個方面為您剖析原因及解決方案：
溶劑效應：
原因：對照品溶劑強度大于流動相強度，可造成的色譜峰前沿、分叉或出現異常峰。
解決方案：使用與流動相初始比例極性相當的溶劑溶解對照品、或降低進樣量。
對照品溶解不充分：
原因：未完全溶解的對照品或微小顆粒在進樣后，會在色譜柱中緩慢溶解，持續(xù)被流動相洗脫出來，導致拖尾。
解決方案：充分振搖、超聲助溶或添加助溶劑（DMSO等），確保對照品完全溶解；在進樣前使用0.22μm或0.45μm的微孔濾膜過濾樣品溶液，去除可能存在的微小顆?；螂s質。
對照品不穩(wěn)定：
原因：對照品在溶劑中發(fā)生了降解，降解產物可能與主成分共洗脫，導致峰形拖尾、展寬。
解決方案：通過對比對照品溶液放置前后的峰面積和峰形變化判斷對照品溶液的穩(wěn)定性，若確定為不穩(wěn)定，則需現配現測，或更換溶劑，規(guī)避不穩(wěn)定性因素。
對照品純度不足：
原因：對照品的雜質與主成分分離度不佳，共洗脫導致峰形拖尾或前沿。
解決方案：換另一品牌或批次對照品進行對比實驗；優(yōu)化色譜條件嘗試分離；使用LC-MS確認峰中是否含有不同質荷比的離子，判斷是否存在雜質。
樣品過載：
原因：對照品濃度過高或進樣體積過大，可能會超過色譜柱的最大載樣量，導致部分對照品無法在色譜柱中充分保留，提前流出，形成前沿峰。
解決方案：降低對照品濃度或減少進樣量。
對照品污染：
原因：配制過程中出現的失誤或者污染，導致污染物與主成分共流出，形成前沿或者拖尾峰。
解決方案：排查配制過程中的量器、容器、溶劑等，避免交叉污染。
流動相pH值不匹配：
原因：當pH值不適當時，對照品與固定相的相互作用不均勻，導致部分分子提前或延遲流出，形成前沿峰或拖尾峰。
解決方案：調節(jié)pH值，讓硅醇基或對照品保持中性，消除離子的相互作用。如堿性化合物可用pH2-4的流動相來抑制硅醇基解離、酸性化合物可用pH2-4的流動相來抑制酸性化合物的自身解離。
色譜柱問題：
原因：長期使用后的色譜柱可能出現填料塌陷、污染等問題，導致固定相吸附點位不均勻，從而影響對照品的保留和分離，產生拖尾或前沿峰。
解決方案：選擇過往檢測峰形較好的樣品復驗，或使用色譜柱廠家推薦的柱效測試方案進行驗證，如明確為柱效下降可嘗試色譜柱再生或更換新的色譜柱。
柱溫過低：
原因：柱溫設置過低，會使流動相粘度增加，對照品在柱內的擴散和傳遞速度變慢，可能會導致峰前沿。
解決方案：適當提高柱溫。
系統死體積過大：
原因：色譜系統管路過長、接頭不匹配、流通池或進樣閥體積過大等，都會導致樣品在柱外區(qū)域滯留和擴散，形成額外的死體積，影響峰形對稱，導致前沿。
解決方案：縮短管路、更換適宜的接頭和部件，減少死體積
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